Fingolimod-S-Fosfatın Mapk Sinyal Yolağı İlişkili Kardiyak Hipertrofi Oluşturma Potansiyelinin H9c2 Hücre Dizisinde Değerlendirilmesi

Arıcan Y. E. (Yürütücü), Özcan M., Kara M., Özhan G.

TÜBİTAK Projesi, 1002 - Hızlı Destek Programı, 2024 - 2025

Proje Türü: TÜBİTAK Projesi
Destek Programı: 1002 - Hızlı Destek Programı
Başlama Tarihi: Aralık 2024
Bitiş Tarihi: Aralık 2025

Proje Özeti

Fingolimodun aktif metaboliti olan fingolimod-s-fosfatın kardiyotoksik etki mekanizmalarının belirlenmesi için Amerikan Hücre Kültür Koleksiyonu (American Type Cell Culture, ATCC) bankasından satın alınan sıçan kardiyomiyoblast hücre dizisi (H9c2) (ATCC® CRL1446™) kullanılacaktır. Sitotoksisite testleri ile IC50 ve IC20 değerleri tespit edildikten sonra IC20 dozunun aşağısındaki Cmax ve Cmax’ın x200 katı aralığındaki katlarda bulunan konsantrasyonlarla çalışılacaktır. Çalışılan konsantrasyonlarda hipertrofi olup olmadığı hücre yüzey alanı ölçümü yapılarak tespit edilecektir. Hipertrofi ve apoptoz için önemli bir indükleyici olan sitoplazmik Ca+2 seviyeleri ortaya konacaktır. Belirlenen maruziyet doz aralığında; oksidatif hasar tespiti hücre akış sitometrisinde reaktif oksijen türleri (reactive oxygen species, ROS) ve elisa yönteminde glutatyon (GSH) analizleri ile, hipertrofi ile beraber oluşan hücresel apoptoz mekanizması Annexin-PI analizi ile gerçekleştirilecek olup apoptoz mekanizmasında ve kardiyak hipertrofiye aracılık etmede önemli rol oynayan MAPK sinyal yolağı biyobelirteç moleküllerinin gen ekspresyon seviyeleri RT-PCR ile protein miktarındaki değişimler ise western blot analizi ile tespit edilecektir. Yolakta; özellikle fingolimod-s-fosfatın teorik olarak S1PR modülasyonu üzerinden etkileyeceği ve kardiyak hipertrofiye aracılık etmede önemli rol oynayan MAPK sinyal yolağı elemanları olan TAK1, ASK1, MEKK1, p38, ERK1/2, ERK 5 ve JNK biyobelirteçleri analiz edilecektir. Watkins vd. (2012)’nin yaptığı çalışmada olduğu gibi kardiyak hipertrofi, kardiyak hipertrofiye aracılık etmede önemli rol oynayan yolaklardan olan MAPK sinyal yolağı elemanları olan biyobelirteçlerin analizi ve hücre yüzey alanı analizi ile tespit edilecektir. Ayrıca antihipertrofik biyobelirteç olan PAK-1 ile kardiyak hipertrofi biyobelirteçleri olan ANP, BNP, HSP60, TLR2 ve TLR4 analizi de gerçekleştirilecektir. Elde edilecek verilerle özellikle fingolimod kaynaklı kardiotoksisiteye yol açabilecek mekanizmalardan oksidatif stres ile apoptozun varlığı ve ne derecede etkin olduğunun tespiti ile başlıca bu toksik etkiler sonucunda oluşabilecek hipertrofik etkinin MAPK sinyal yolağı ile ilişkisinin ortaya konması, yani temelde fingolimodun kardiyotoksik mekanizmasının gelecekte gerçekleştirilecek çalışmalarla beraber hücresel düzeyde aydınlatılmasına ışık tutması hedeflenmektedir.